熒光分光光度計(jì)是用于掃描液相熒光標(biāo)記物所發(fā)出的熒光光譜的一種儀器。
其能提供包括激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及熒光強(qiáng)度、量子產(chǎn)率、熒光壽命、熒光偏振等許多物理參數(shù),從各個(gè)角度反映了分子的成鍵和結(jié)構(gòu)情況。通過(guò)對(duì)這些參數(shù)的測(cè)定,不但可以做一般的定量分析,而且還可以推斷分子在各種環(huán)境下的構(gòu)象變化,從而闡明分子結(jié)構(gòu)與功能之間的關(guān)系。
熒光分光光度計(jì)的激發(fā)波長(zhǎng)掃描范圍一般是~,發(fā)射波長(zhǎng)掃描范圍~??捎糜谝后w、固體樣品(如凝膠條)的光譜掃描。
它的來(lái)光路有兩套分光系統(tǒng)自,分別的激發(fā)和發(fā)射光分光系統(tǒng),光傳播方向是互垂直的.繪制譜圖方法:1.激發(fā)波長(zhǎng)不變,以發(fā)射波長(zhǎng)進(jìn)行掃描;2.發(fā)射波長(zhǎng)不變,以激發(fā)波長(zhǎng)進(jìn)行掃描.要到最佳激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng),都要做這兩種掃描。
熒光分光光度計(jì)有什么優(yōu)缺點(diǎn)
優(yōu)點(diǎn):靈敏度高,可以用于掃描液相熒光標(biāo)記物所發(fā)出的熒光光譜,不但可以做一般的定量分析,
而且還可以推斷分子在各種環(huán)境下的構(gòu)象變化,
從而闡明分子結(jié)構(gòu)與功能之間的關(guān)系。1、熒光的光強(qiáng)并不高,所以呈線性情況有時(shí)不很理想;
2、某些反應(yīng)熒光持續(xù)的時(shí)間較短;
3、熒光的發(fā)散方向不集中,不像透射光那樣集中,強(qiáng)度高;
4、受某些離子的干擾影響,熒光會(huì)湮滅,試驗(yàn)速度必須要快。
熒光分光光度計(jì)與熒光光度計(jì)有什么樣的區(qū)別
熒光測(cè)定需要單色性較高的激發(fā)光,通常會(huì)在光束進(jìn)入樣品之前經(jīng)單色器分光內(nèi),保留所感興趣容的激發(fā)波長(zhǎng)或波段。
較常見的單色器為棱鏡或是光柵,在一些簡(jiǎn)易的熒光系統(tǒng)中也可使用濾波片。在該系統(tǒng)中,由激發(fā)光源發(fā)出的光經(jīng)激發(fā)單色器分光獲得特定波長(zhǎng)的激發(fā)光,然后射入樣品池,激發(fā)熒光物質(zhì)的熒光發(fā)射。
熒光分光光度計(jì)與熒光光度計(jì)的區(qū)別在于兩者之間的分光系統(tǒng),前者可以采用色散型單色器,可對(duì)入射和發(fā)射光波長(zhǎng)進(jìn)行選擇,可進(jìn)行入射/發(fā)射波長(zhǎng)掃描,多見于大型通用儀器;后者采用濾光片,具有固定的光譜通帶,一般用于專用儀器中。
熒光分光光度計(jì)常用的光源是什么
看你分光光度計(jì)的波長(zhǎng)范圍。以上的用高級(jí)白熾燈,有短波的加氘燈。
熒光分光光度計(jì)原理及結(jié)構(gòu)?
基本原理
由高壓汞燈或氙燈發(fā)出的紫外光和藍(lán)紫光經(jīng)濾光片照射到樣品池中,激發(fā)樣品中的熒光物質(zhì)發(fā)出熒光,熒光經(jīng)過(guò)濾過(guò)和反射后,被光電倍增管所接受,然后以圖或數(shù)字的形式顯示出來(lái)。物質(zhì)熒光的產(chǎn)生是由在通常狀況下處于基態(tài)的物質(zhì)分子吸收激發(fā)光后變?yōu)榧ぐl(fā)態(tài),這些處于激發(fā)態(tài)的分子是不穩(wěn)定的,在返回基態(tài)的過(guò)程中將一部分的能量又以光的形式放出,從而產(chǎn)生熒光.
不同物質(zhì)由于分子結(jié)構(gòu)的不同,其激發(fā)態(tài)能級(jí)的分布具有各自不同的特征,這種特征反映在熒光上表現(xiàn)為各種物質(zhì)都有其特征熒光激發(fā)和發(fā)射光譜;,因此可以用熒光激發(fā)和發(fā)射光譜的不同來(lái)定性地進(jìn)行物質(zhì)的鑒定。
在溶液中,當(dāng)熒光物質(zhì)的濃度較低時(shí),其熒光強(qiáng)度與該物質(zhì)的濃度通常有良好的正比關(guān)系,即IF=KC,利用這種關(guān)系可以進(jìn)行熒光物質(zhì)的定量分析,與紫外-可見分光光度法類似,熒光分析通常也采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行。
基本結(jié)構(gòu)
1.光源:
為高壓汞蒸氣燈或氙弧燈,后者能發(fā)射出強(qiáng)度較大的連續(xù)光譜,且在~范圍內(nèi)強(qiáng)度幾乎相等,故較常用。
2.激發(fā)單色器:
置于光源和樣品室之間的為激發(fā)單色器或第一單色器,篩選出特定的激發(fā)光譜。
3.發(fā)射單色器:
置于樣品室和檢測(cè)器之間的為發(fā)射單色器或第二單色器,常采用光柵為單色器。篩選出特定的發(fā)射光譜。
4.樣品室:
通常由石英池(液體樣品用)或固體樣品架(粉末或片狀樣品)組成。測(cè)量液體時(shí),光源與檢測(cè)器成直角安排;測(cè)量固體時(shí),光源與檢測(cè)器成銳角安排。
5.檢測(cè)器:
一般用光電管或光電倍增管作檢測(cè)器??蓪⒐庑盘?hào)放大并轉(zhuǎn)為電信號(hào)。
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